
货号:02.13069-100品牌:EallBio基本售价:720.00元
羟自由基清除能力测定试剂盒(微量法)
货号:02.13069-100
规格:100 T
保存:2-8 ℃保存
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系亿奥邦工作人员。
产品组成 |
100 T |
提取液 |
60 mL |
试剂一 |
22 mL |
试剂二 |
200 μL |
试剂三 |
11 mL |
VC标准品(1 mg/mL) |
1 mL |
说明书 |
1份 |
产品简介:
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基,水杨酸能有效捕捉产生的羟自由基并与其反应生成有色物质2,3-二羟基苯甲酸,在510 nm处有最大吸收峰,加入具有清除能力的物质后,有色物质便会减少,从而可以根据吸光值的数值判断样品清除羟自由基的能力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
自备实验用品:分析天平、紫外分光光度计、比色皿、低温离心机和蒸馏水。
使用说明(仅供参考):
一、样品的制备:
1. 组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)1:5~10的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL蒸馏水)进行冰浴匀浆,然后10000 g,4 ℃离心10 min,取上清,置冰上待测。
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5 mg/mL。
二、测定步骤:
1. 紫外分光光度计预热30 min,调节波长至510 nm。
2. 将试剂二按1:800以水稀释,现用现配。
3. 在4 mL EP管中加入如下试剂
A(对照管) |
B(样品管) |
C(对照参比管) |
D(样品参比管) |
100 μL蒸馏水 |
100 μL样品液 |
100 μL蒸馏水 |
100 μL样品液 |
100 μL试剂一 |
100 μL试剂一 |
100 μL试剂一 |
100 μL试剂一 |
200 μL试剂二 |
200 μL试剂二 |
200 μL试剂二 |
200 μL试剂二 |
反应10分钟 |
|||
100 μL试剂三 |
100 μL试剂三 |
100 μL无水乙醇 |
100 μL无水乙醇 |
加试剂三后离心3 min,吸取上清液200 μL于510 nm处测定吸光度。管A和C只需测定一次。若无510 nm波长也可选其附近。
三、计算公式:
清除率(%)=(A-C)-(B-D)/(A-C)×100%;A、B、C、D为510 nm处各管吸光度值
注意事项:
为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。
附录(仅供参考):
Vc浓度(mg/mL) |
0.015625 |
0.03125 |
0.0625 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
清除率(%) |
5.27 |
6.8 |
13.94 |
18.51 |
27.13 |
45.89 |
97.6 |
Vc浓度和OH自由基清除率关系图 实验实际照片
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