货号:02.13062-100品牌:EallBio基本售价:440.00元
快速ABTS自由基清除能力检测试剂盒(微量法)
货号:02.13062-100
规格:100T
保存:2-8 ºC保存,一年有效。其中试剂四溶液需-20 ℃保存。
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系亿奥邦工作人员。
产品组成 |
规格(100 T) |
提取液 |
液体80mL×1瓶 |
试剂一 |
粉剂0.55 mg × 1支 |
试剂二 |
液体1 mL × 1支 |
试剂三 |
液体16 mL × 1支 |
试剂四 |
液体250 μL × 1支 |
试剂五 |
粉剂5 mg × 1支 |
说明书 |
1份 |
产品简介:
总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS快速法),即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with a Rapid ABTS method,简称T-AOC Assay Kit,是一种采用2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)作为显色剂,可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行快速检测的试剂盒。
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧,同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后,可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤,诱发氧化应激(Oxidative stress),继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。
机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等,可以清除体内产生的各种活性氧,以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液,细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱,可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
ABTS法测定总抗氧化能力的原理参考图1,ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS·+,在抗氧化物存在时ABTS·+的产生会被抑制,在414 nm或734 nm测定ABTS·+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。
图1. ABTS法检测总抗氧化能力的原理图
溶液配制:
1. 试剂一:临用前加入1 mL蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂可分装后保存,-20 ℃可保存四周,避免反复冻融。
2. 试剂四工作液的配制:可先将试剂四-20 ℃分装保存。临用前根据样本量按试剂四:试剂三(V:V)=1:9的比例配成试剂四工作液,现配现用,用不完的试剂放于-20 ℃可保存两周。
3. 试剂五:粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中,含有5 mg维生素C,临用前加入2.8 mL水,充分振荡溶解;配成10 mmol/L维生素C溶液,用于阳性对照。2-8 ℃可保存两周。
4. ABTS工作液的配制:临用前根据试验所需量按试剂三:试剂一:试剂二工作液(V:V:V) =76:5:4的比例配成ABTS工作液,现用现配,室温避光保存,务必在30 min内使用。
注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测
需自备的仪器和用品:酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、蒸馏水。
操作说明(仅供参考):
一、测定步骤:
1. 酶标仪预热30 min以上,调节波长至405 nm。
2. 阳性对照的准备:若需要线性关系,建议将10 mmol/L 的维生素C溶液用水配制成0.4、0.3、0.2、0.15、0.1、0.08、0.04 mmol/L 的维生素C溶液待用;若需要清除率约为 90%的阳性对照,则建议将10 mmol/L 维生素C溶液用提取液配制成大于1 mmol/L 的维生素C溶液待用。
备注:实验中每个标准管需10 μL维生素C溶液。
3. 操作表:在96孔板或EP管中分别加入下列试剂:
试剂名称(μL) |
空白管 |
测定管 |
阳性对照管 |
待测样品 |
- |
10 |
- |
蒸馏水 |
10 |
- |
- |
试剂四工作液 |
20 |
20 |
20 |
试剂五 |
- |
- |
10 |
ABTS工作液 |
170 |
170 |
170 |
充分混匀,室温避光静置6 min。测定405 nm处的吸光度。分别记为A空白、A测定、A阳性对照,阳性对照标准曲线和空白管只需测1-2次。
二、ABTS 自由基清除率的计算
1. 阳性对照的自由基清除率计算公式:ABTS自由基清除率DVC% =[(A空白-A阳性对照)÷A空白]×100%。
2. 样本的自由基清除率计算公式:ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%。
注意事项:
1. 不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大,如果要比较不同样本的ABTS自由基清除能力,建议对于同一批样本加入等量的样本,红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。在比较时,将样本根据预实验结果进行适当调整,比较同样浓度(相同稀释倍数)的清除率大小。
2. 样本建议当天提取当天检测。
附录(仅供参考):
标准曲线制作:在室温条件下按说明书操作,对系列标准品进行吸光度的测定,横坐标为浓度,纵坐标为吸光度,其数值及标曲如下(仅供参考)
标准品浓度(mmol/L) |
0.4 |
0.3 |
0.2 |
0.15 |
0.1 |
0.08 |
0.04 |
吸光度 |
0.579 |
0.517 |
0.479 |
0.418 |
0.333 |
0.198 |
0.098 |
ABTS参考标准曲线 实验现象图片
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