增强型Cell Counting Kit-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

货号： 03.S17002DA/03.S17002DB/03.S17002DC

一、产品描述

Cell Counting Kit-8 ( CCK-8 )是WST-8在电子耦合试剂的作用下,可被细胞线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜染料。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅(生成的formazan量)和细胞数目呈线性关系。

CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分,可广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测。该试剂盒无放射性。

二、产品规格及保存条件

产品名称	货号	规格	描述
增强型CCK－8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	03.S17002DA	100T	是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒，比普通的CCK-8试剂盒具有更好的检测灵敏度和更宽的线性范围
	03.S17002DB	500T
	03.S17002DC	1000T

4°C避光保存，有效期一年。冰袋运输。

三、使用说明：

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测， 也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

1 标准曲线制作

1)先用细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞；

2)按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做5-7个细胞浓度梯度,每组2-3个复孔；

3)接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后每100μL培养基加10μL CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

2 细胞活性检测

1) 在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养24小时

2) 向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡)

3) 将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

4) 用酶标仪测定450nm处的吸光度。

3 细胞增殖-毒性检测

1) 在 96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养24小时；

2) 向培养板加入不同浓度的待测药物；

3) 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；

4) 向每孔加入10μL的CCK-8溶液 (注意不要产生气泡) ；

5) 将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

6) 用酶标仪测定450nm处的吸光度。

4 计算公式

细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%

抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100%

As: 实验孔吸光度 (含细胞,培养基,CCK-8溶液和药物溶液)

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞,培养基,CCK-8溶液,不含药物)

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基,CCK-8溶液,不含细胞,药物)

四、注意事项

1) CCK-8 的培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

2)接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发,为了减少误差,建议培养板的四边每孔只加培养基,而不作为指标检测孔。

3) 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

4)培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时通过扣除空白孔中本底的吸光度  而消去,因此不会对检测造成影响。

5)CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深,OD值   不断增加。(注:活细胞内的脱氢酶是持续产生的)

6) 以下方法可以终止CCK-8 反应(96 孔板)：

(a) 在显色反应后,将培养板放置4 °C冰箱内。

(b) 每孔加10 μL 0.1MHCl溶液。

(c) 每孔加10 μL 1 %(w/v)的SDS(十二烷基 硫酸钠)溶液。

注意：反应停止后,应在24小时内测定。

7) 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

8) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

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日期：	2023-09-30
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