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SDS裂解液 02.12259-100

货号:02.12259-100品牌:EallBio基本售价:370.00元

储存条件:-20℃,1年

 

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02.12259-100 EallBio 100ml 370.00元

 


SDS裂解液

货号:02.12259-100

规格:100 ml

保存:-20 ℃保存,有效期1年。

产品简介:

本裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液。使用本裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGEWestern、免疫沉淀(immunol precipitationIP、免疫共沉淀(co-IP)ELISA,本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品

如发现 SDS 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量,取每1 ml SDS裂解液加入10ul PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。混匀备用(PMSF 现用现加。样本裂解均需要冰上或低温操作,裂解时间20-30分钟。

SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用亿奥邦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(02.12266-500)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

操作步骤:

1、样品前处理:

a)对于贴壁细胞去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗。按照6孔板每孔加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

b)对于悬浮细胞离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

c)对于组织样品把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

2、后处理

将裂解后的样品10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGEWestern blottingChIP染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等操作。

注意事项:

1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞多会造成细胞裂解液粘稠此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳。

3. 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并戴一次性手套操作。


用户名: 匿名用户
日期: 2023-12-08
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