SDS裂解液

货号：02.12259-100

规格：100 ml

保存：-20 ℃保存，有效期1年。

产品简介：

本裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液。使用本裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀（immunol precipitation，IP）、免疫共沉淀（co-IP）和ELISA等，本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。

如发现 SDS 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1 ml SDS裂解液加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。样本裂解均需要冰上或低温操作，裂解时间20-30分钟。

用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用亿奥邦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(02.12266-500)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

操作步骤：

1、样品前处理:

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和ChIP（染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation）等操作。

注意事项：

1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠，此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳。

3. 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿戴实验服并戴一次性手套操作。