
货号:02.12259-100品牌:EallBio基本售价:370.00元
储存条件:-20℃,1年
SDS裂解液
货号:02.12259-100
规格:100 ml
保存:-20 ℃保存,有效期1年。
产品简介:
本裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液。使用本裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等,本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。
如发现 SDS 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每1 ml SDS裂解液加入10ul PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。样本裂解均需要冰上或低温操作,裂解时间20-30分钟。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用亿奥邦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(02.12266-500)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
操作步骤:
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
2、后处理:
将裂解后的样品10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等操作。
注意事项:
1. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2. 本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠,此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳。
3. 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并戴一次性手套操作。
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电话: 400-888-1804
销售邮箱: sales-china@eallbio.com
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